除了两位水管工兄弟,游戏中的经典角色也在电影中亮相。碧姬公主作为蘑菇王国意志坚定的统治者,在片中对马力欧进行了严酷的作战训练,以帮助后者挖掘自身潜力。喜剧演员杰克·布莱克、塞斯·罗根则为片中的大反派酷霸,以及“搞笑担当”大猩猩咚奇刚配音。值得一提的还有,为游戏中的马力欧和路易吉兄弟配音长达三十余年的查尔斯·马丁内斯,也在片中友情客串。在最后的剧情中,江心(毛雪雯饰)为了争夺电视台的组长一职,也为了打败徐来(章若楠饰),被蒙蔽了良知将徐来关进冷藏库,涉嫌故意伤害罪被警察逮捕。看到江心这一结局的网友直呼大快人心,于此同时毛雪雯自然、松弛有度的表演风格也广受网友好评。